文库制备是测序实验流程中非常关键的一环，随着基因测序的应用持续深化和广泛，对高通量、高质量、高度自动化的测序需求与日俱增。传统的手工操作会花费大量时间，更容易带来样本间的误差及交叉污染的风险问题。针对这些问题，自动化设备的引入可以有效解决其制备流程复杂、操作繁琐、耗时长、操作专业度高等一系列问题。

亚洲bet356体育在线官网的自动化样本制备系统MGISP-960整合了温控模块、扩增模块、振荡模块、磁力架模块等多种功能模块，具有很高的准确性和可靠性。在批量文库制备过程中，引入自动化设备和技术，成为越来越多高通量、交付型实验室的选择。

近日，亚洲bet356体育在线官网携手翌圣生物，在高通量测序建库试剂、国际市场拓展等方向达成战略合作，并在自动化建库设备达成联合品牌推广合作共识。双方将携手一起为行业带来更加高效、高品质的组合产品，全面推动肿瘤、病原、遗传、科研等领域的发展。为了提升效率和质量，翌圣生物的RNA建库试剂盒在MGISP-960进行了自动化建库适配。

本文将针对翌圣生物的测序文库构建产品预混版RNA建库试剂盒Hieff NGS®Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit(Premixed version)在亚洲bet356体育在线官网MGISP-960高通量样本制备系统上的适配情况做出测评。

测评方案

翌圣生物的预混版RNA建库试剂盒Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit(Premixed version)包含RNA片段化试剂，反转录试剂，常规和链特异性ds-cDNA合成试剂以及文库扩增试剂（表1）；且此试剂盒可衔接mRNA纯化试剂盒或rRNA去除试剂盒构建测序文库。此试剂盒各模块Buffer和Enzyme已提前预混，简化试剂准备的同时也减少了自动化设备分装混匀的步骤，使得全流程自动化程度更高；且所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度地保证了文库构建的稳定性和重复性。

翌圣生物的预混版RNA建库试剂盒基于亚洲bet356体育在线官网MGISP-960高通量样本制备系统，每轮实验（96 samples/run）建库全流程（含mRNA捕获）时间由手工建库的7.5h缩短为自动化建库的6h，其中5.5h为自动化运行时间，手工操作时间仅为0.5h（图1）。

图1 预混版RNA建库试剂盒基于MGISP-960的自动化建库全流程（含mRNA捕获）

测评结果

1. 稳定的文库产出

自动化文库产出约为手工文库产出的80%，满足后续测序需求；且基于翌圣预混版RNA建库试剂盒，文库产出波动控制在10%以内（CV值为8%），相对手工建库具有更好的稳定性（图2）。

图2 预混版RNA建库试剂盒基于MGISP-960的自动化建库及手工建库的文库产出

2. 一致的文库峰型

自动化文库峰型一致，且片段大小均符合预设标准（300~400bp）。

图3 预混版RNA建库试剂盒基于MGISP-960的自动化文库峰图

3. 优秀的下机数据表现

以翌圣生物的预混版RNA建库试剂盒构建RNA文库，起始量1000ng human total RNA，12cycles，采用DNBSEQ-T7测序平台，PE150测序模式，统一截取1G的下机数据进行分析，得到Q30>92%、比对率＞98 %、rRNA比例<1%等优秀指标（表2）。

4. 一致的分析结果

文库的5’及3’端在测序结果中有较高的基因覆盖度，分别为30%和50%，文库的基因中间区域捕获均匀；且手工文库和自动化文库的基因覆盖度表现高度一致（图4）。

图4 预混版RNA建库试剂盒基于MGISP-960自动化建库和手工建库的基因覆盖度

对14例样本的测序结果进行聚类分析，显示同批次的自动化文库和手工文库均有较高的关联性（图5）。

图5 14例样本的文库分析结果相关性

测评结论基于MGISP-960高通量样本制备系统使用翌圣生物的预混版RNA建库试剂盒Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit(Premixed version)，仅用6小时即可完成完整的RNA文库建库流程。相比手工建库，亚洲bet356体育在线官网的MGISP-960高通量样本制备系统效率更高、数据表现稳定，可生成高度均一的文库。同时作为开放、可拓展的建库设备，亚洲bet356体育在线官网的MGISP系列产品可适配不同类型的第三方试剂，为大规模检测的科研应用提供卓越的自动化建库实验平台。

亚洲bet356体育在线官网持续深耕拓展实验室自动化业务，已经逐步形成了样本前处理、核酸提取、移液工作站等全方位、全流程的自动化产品线布局。亚洲bet356体育在线官网一直以来坚持以科技创新为本，积极搭建开放创新的应用生态建设，助力生命科学行业逐步实现从硬件、工具到生态平台的跃迁。